Staph Diagnosis (Lab Tests) e Epidemiology (Where It Lives)

Onde S. aureus vive?

S. aureus vive em:

• Pessoas saudáveis ( portadores de S. aureus ): na mucosa do nariz , menos comumente na garganta, vagina, intestinos e pulmões; na pele: principalmente nas axilas, sob os seios e na virilha
• Pessoas infectadas : em lesões de pele, sangue, fezes, urina, mucosa respiratória, genitais, abscessos de órgãos internos
• Animais : em animais de estimação (pele, pele, narinas) e animais de fazenda (úberes de vacas, cavalos, aves de capoeira)
• Comida contaminada : leite (de vaca infeccionada), comida preparada e mantida fora de um refrigerador durante algumas horas (contaminação de trabalhador de comida infetado)
• Equipamentos esportivos , brinquedos, superfícies e outros objetos inanimados conhecidos como fomites.
• Ar, água, solo, poeira (fontes menos importantes).

Reservatório de Staph

O reservatório primário de S. aureus (incluindo MRSA) é um humano. O staph é comum em vacas (mastite), aves de capoeira e animais de estimação (cães, gatos). No Canadá, eles encontraram MRSA em suínos ( 1 ).

Como é a disseminação da infecção por staph

O estafilococo pode se espalhar de uma localização da pele para outra ( auto-infecção ), por exemplo, escolhendo o nariz seguido de coçar a pele ou por roupas. A propagação de pessoa para pessoa é possível através de contato pele a pele, ou com compartilhamento de brinquedos, toalhas, equipamentos esportivos, chuveiros públicos, sauna ou piscinas. Uma infecção também pode ser disseminada por portadores de estafilococos saudáveis , especialmente pelo pessoal de saúde. O staph pode se espalhar de humanos para cães ou outros animais de estimação e depois de volta para o humano ( 2 ). S. aureus pode ser encontrado na pele, cabelo, narinas ou saliva de cães. Endocardite de staph grave foi relatada após uma pequena mordida de cão ( 3 ). Infecção pela ordenha de uma vacater staph mastitis é possível ( 4 ). A intoxicação alimentar por staph pode ocorrer após a ingestão de alimentos contaminados com estafilococos, liberados de um trabalhador de alimentos infectados.

Os pontos de entrada da infecção por estafilococos são:

• Pele: folículo piloso durante trauma ou depilação menores, acne, eczema (psoríase, dermatite atópica), lesões na pele, queimaduras, injeção, perfuração e punções de tatuagem, cateteres vasculares e urinários, feridas cirúrgicas;
• Trato respiratório : pneumonia estafilocócica pode ser uma complicação da gripe ou aspiração.

Fazenda a Tabela Continuum of S. aureus

O staph pode sobreviver em animais domésticos, como cães, gatos e cavalos, e pode causar um zumbido em galinhas e mastite em vacas. Quando as bactérias entram no leite ou na carne, elas se multiplicam e liberam a toxina. A intoxicação alimentar é possível mesmo com leite cozido, sorvete ou carne defumada, como salame, já que as toxinas de S. aureus não são destruídas pelo calor.

Quem está em risco de contrair infecção por estafilococos?

Esses são:

• Pessoas com sistema imunológico fraco: crianças pequenas, idosos em lares de idosos, diabéticos, pacientes com câncer ou com AIDS, e aqueles em terapia imunossupressora ou diálise
• Pacientes hospitalizados com feridas cirúrgicas, queimaduras, traumas, tubos de alimentação, cateteres, articulações protéticas ou válvulas cardíacas
• Pessoal de saúde
• Viciados em drogas por via intravenosa
• Mães amamentando
• Atletas
• Soldados, prisioneiros e outros que vivem em comunidades lotadas
• Agricultores podem ser infectados por mastite de vacas

Período de Incubação de S. aureus

O período de incubação da infecção por S. aureus pode variar muito, mas é comumente entre 4-10 dias ( 5 ). O período de incubação na intoxicação alimentar do staph é de 30 minutos a 8 horas ( 6 ).

Infecção por Staph Incidência e Mortalidade

Nos Estados Unidos, em y. 2006, aproximadamente 32% da população foi colonizada com S. aureus e 0,8% com MRSA. O MRSA causa cerca de 94.000 infecções graves e cerca de 19.000 mortes nos EUA a cada ano ( 7 ).

Referências:

1. MRSA em porcos (thepigsite.com)
2. Humano – animal – propagação humana de S. aureus (cdc.gov)
3. Mordida de cão resultou em endocardite crônica (medscape.com)
4. Mastite staph em vacas (usjersey.com)
5. Período de incubação de S. aureus (cinetwork.com)
6. Período de incubação de intoxicação alimentar Staph (drgreene.com)
7. Morbidade e mortalidade de S. aureus nos Estados Unidos (cdc.gov)

Diagnosticar uma infecção por Staph

1. Obtenção de uma amostra de tecido infectado

Para um diagnóstico de infecção por estafilococos, é necessário obter uma amostra de uma lesão infectada (secreção nasal, pus, sangue, líquido cefalo-raquidiano, urina, aspiração celular de pulmões ou osso). Os sintomas das infecções por estafilococos são frequentemente causados ​​por toxinas , liberadas apenas de alguns estafilococos, portanto, uma cultura de lesão obviamente infectada pode ser negativa! Por esse motivo, amostras de mais de uma lesão devem ser fornecidas, se possível.

O que é Staphylococcus aureus? 
Fotos de foliculite estafilocócica

2. Coloração de Gram

Uma amostra clínica é colocada em um slide e enxaguada com:

1. Violeta de Cristal
2. Solução de iodo (o Mordente)
3. Decolorante (etanol)
4. Safranina (a contra-mancha)
5. agua

Após este procedimento, S. aureus e outros estafilococos devem ser azuis, roxos ou violetas sob o microscópio de luz, o que é observado como Gram-positivo (Gram +), ( Figura 1 ). Bactérias que são coloridas de rosa claro são notadas como Gram negativas (Gram -), ( 1 ). A coloração de Gram é realizada apenas quando a infecção mista com bactérias Gram + e Gram – é esperada.

Imagem 1 . S. aureus Gram positivo ,
microscópio de luz, Magn. ~ 100x
(fonte: phil.cdc.gov)

3. Staphylococcus aureus Cultura

Quando o staph é esperado, uma parte de uma amostra médica é espalhada sobre o agar de soja tripticase (TSA) com 5% de sangue de ovelha (BAP = placa de ágar de sangue), ( 2 ). Em tais ágar, S. aureus forma colônias amarelo-douradas (creme branco a laranja), ( 3 ), enquanto S. epidermidis forma colônias brancas ( Figura 2 ). A cultura geralmente precisa de 16-18 horas para crescer (até 48 horas para hemocultura) a 35 ° C ( 4 ). S. aureus  é geralmente hemolítico no sangue de ovelhas e S. epidermidis não é. Em amostras mistas, contendo bactérias Gram + e -, pode ser utilizada uma placa CNA baseada em ágar Columbia (ácido colisitina / naladixico) para suprimir o crescimento Gram negativo.

Figura 2. Cultura staph: S. aureus
dourado  e colônia branca de S. epidermidis .

4. Ensaios Enzimáticos

a) O  teste de catalase é realizado adicionando 3% de peróxido de hidrogênio a uma colônia em ágar. Estafilococos contêm catalase, e quebrar o peróxido, produz O ₂ e bolha, então eles são catalase positiva , o que os distinguem dos estreptococos. O teste de catalase é feito somente quando uma cultura não é típica.

b) Teste de coagulase . S. aureus (e S. intermedius , que não é patogénico para humanos) causa coagulação (coágulo de fibrina) de um plasma de coelho, pelo que é coagulase positiva , o que a distingue de todos os outros estafilococos. No teste de aglutinação em látex ( teste de deslizamento ), são usadas partículas de látex cobertas com fibrinogênio e IgG. Anticorpos IgG se ligam à coagulase em S. aureus , o que resulta em partículas de látex aglomeradas em cerca de 20 segundos ( 5 ). Este teste de slides pode ser negativo em um pequeno percentual; neste caso, um teste de tubo , que detecta a coagulase livre e ligada, deve ser realizado (5 ). Cerca de 97% dos  isolados humanos de S. aureuspossuem ambas as formas de coagulase ( 6 ).

c) Hemólise . S. aureus causa hemólise em ágar sangue, mas S. epidermidis não. Algumas  cepas de S. aureus não são hemolíticas ( 7 ).

5. Diagnóstico Rápido de Staphylococcus aureus com PCR

A detecção rápida de S. aureus é possível através de testes usando  Reação em Cadeia Polimerase Quantitativa (qPCR) , também chamada de PCR em tempo real .

Princípio da PCR

Em amostras clínicas, o S. aureus  está presente em quantidades não suficientes para ser determinado com exatidão por qualquer método de teste, de modo que as bactérias devem ser multiplicadas pela cultura, o que geralmente leva de 1 a 4 dias. Com uma PCR, alguns milhões de cópias de DNA de S. aureus podem ser obtidas diretamente de uma amostra clínica (sem cultura necessária) dentro de algumas horas.

Procedimento de PCR

Uma amostra de staph DNA, polimerase – uma enzima necessária para a duplicação de DNA, uma seqüência de nucleotídeos (primer), necessária para o início da duplicação, e uma grande quantidade de nucleotídeos livres são necessários para a PCR. A polimerase é obtida a partir de uma bactéria  Thermus aquaticus  (Taq polimerase). Todos os componentes são adicionados em um tubo de teste, que é colocado em um termociclador. Após alguns ciclos de PCR, a eletroforese em gel de agarose e a técnica de Southern blotting são usadas para determinar se o DNA obtido é DNA de S. aureus ( 8 ).

6. Kits de Detecção de Staphylococcus aureus

Kits para detecção de várias espécies de estafilococos ou suas toxinas de tecidos humanos, alimentos, leite de vaca, água e outras fontes ambientais, estão comercialmente disponíveis.

Exemplos de kits, baseados em aglutinação,  para detecção de MRSA  em amostras clínicas (após cultura) são: teste Dry Spot Staphytect Plus ^® , teste Pastorex Staph Plus ^® , teste Slidex Staph-Kit ^® , Slidex Staph Plus ^® , StaphaurexPlus ^® e teste de Staphylase ^® . A especificidade e a sensibilidade desses kits foram avaliadas por três institutos de saúde alemães em y. 2005 ( 9 ).

Os testes Xpert MRSA / SA-Blood Cultures (BC) e Xpert MRSA / SA-Skin and Soft Tissue Infection (SSTI) são capazes de detectar simultaneamente MRSA e  S. aureus  diretamente de hemoculturas e amostras de tecido mole infectado, usando PCR . Ambos os testes dão resultados em aproximadamente 50 minutos  ( 10 ).

Os alimentos podem ser testados para enterotoxinas por staph ELISA. A presença de   bactérias S. aureus nos alimentos pode ser confirmada por TAQMAN (PCR), ou  Slidex Staph Kit (látex aglutinação) ( 11 ).

O leite pode ser testado para mastite de vaca por Bulk Tank Culture (BTC), California Mastitis Test (CMT) e, especificamente, para mastite por staph pelo teste de anticorpos do leite Prostaph © ( 12 ). O ensaio multiplex PCR em tempo real para a detecção simultânea de Staphylococcus aureus , Streptococcus agalactiae e Streptococcus uberis diretamente do leite foi desenvolvido ( 13 ). O teste leva 24 horas para ser concluído.

Água, a fim de ser testada para S. aureus , é filtrada e então a membrana filtrante é colocada em agar sal manitol modificado para cultura ( 14 ).

7. Staphylococcus aureus Teste de sensibilidade aos antibióticos

O S. aureus de uma lesão infectada tem de ser cultivado num meio sólido e depois a suspensão apropriada preparada a partir de poucas colónias cultivadas. A suspensão com bactérias é esfregada sobre um ágar Mueller-Hinton ( figura 3 ), ( 15 ). Discos impregnados com vários antibióticos são colocados em agar e incubados por 24 horas a 35 ° C. As zonas de inibição do crescimento bacteriano, medidas em torno dos discos, devem ser comparadas com as do Documento M100 (M2) do National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Os resultados obtidos podem então ser relatados como resistentes, intermediários ou suscetíveis.

Figura 3. Teste de sensibilidade aos antibióticos do S. aureus .
Áreas de crescimento bacteriano inibido são vistas em torno de discos de antibióticos.
(fonte: phil.cdc.gov)

Formulário de Relatório de Microbiologia para S. aureus

Abaixo estão três exemplos de Relatório de Microbiologia, preenchidos por microbiologista após testes de laboratório, e enviados de volta ao médico do paciente.

a) Relatório de drenagem de um carbúnculo cutâneo infectado por S. aureus:

Fonte (localização anatômica): Drenagem do abscesso cervical
Coloração de Gram: muitos cocos Gram-positivos. Crescimento pesado. Muitos leucócitos (presença de glóbulos brancos indicam inflamação).
Organismo: Staphylococcus aureus
Suscetibilidade a antibióticos:

* MIC (Concentração Inibitória Mínima) = a menor concentração de agente antimicrobiano que inibe o crescimento do micróbio. A MIC é determinada pela adição de quantidades crescentes de antibiótico (método de titulação) à amostra médica.
** SENS = sensibilidade; S = sensível, R = resistente.
*** Bactérias na amostra acima foram suscetíveis à oxacilina, então esta é SA sensível à meticilina (SA “normal”). Para determinar a resistência à meticilina, usa-se oxacilina em vez de meticilina, porque a meticilina não está mais comercialmente disponível nos Estados Unidos e porque a oxacilina mantém sua atividade durante o armazenamento melhor do que a meticilina ( 16 ).

b) Relatório de sangue infectado por MRSA:

Fonte :
Coloração de Gram no sangue : muitos glóbulos brancos. Poucos cocos Gram-positivos. Crescimento leve.
Organismo : Staphylococcus aureus
Suscetibilidade a antibióticos :

* Alta dose de oxacilina foi necessária para inibir as bactérias, então isso é considerado como um staph resistente à meticilina – MRSA.

c) Relatório de swab nasal COLONIZADO por S. aureus:

Fonte :
Coloração de Gram da mucosa nasal : cocos Gram positivos. Crescimento leve. Sem glóbulos brancos *
Organismo : Staphylococcus aureus
Suscetibilidade a antibióticos :

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